(Citometría de flujo, FCM) es un analizador celular que mide la intensidad de fluorescencia de marcadores celulares teñidos. Se trata de una tecnología de alta tecnología desarrollada a partir del análisis y clasificación de células individuales. Puede medir y clasificar rápidamente el tamaño, la estructura interna, el ADN, el ARN, las proteínas, los antígenos y otras propiedades físicas o químicas de las células, y puede basarse en la recopilación de estas clasificaciones.
El citómetro de flujo consta principalmente de las cinco partes siguientes:
1 cámara de flujo y sistema de fluidos
2 Fuente de luz láser y sistema de conformación del haz.
3 sistema óptico
4 Electrónica, almacenamiento, visualización y sistema de análisis.
Sistema de clasificación de 5 celdas
Entre ellos, la excitación láser en la fuente de luz láser y el sistema de formación del haz es la principal medida de las señales de fluorescencia en la citometría de flujo. La intensidad de la luz de excitación y el tiempo de exposición están relacionados con la intensidad de la señal de fluorescencia. El láser es una fuente de luz coherente que puede proporcionar iluminación de longitud de onda única, alta intensidad y alta estabilidad. Es la fuente de luz de excitación ideal para cumplir con estos requisitos.
Hay dos lentes cilíndricas entre la fuente láser y la cámara de flujo. Estas lentes enfocan un rayo láser con una sección transversal circular emitido desde la fuente láser en un haz elíptico con una sección transversal más pequeña (22 μm × 66 μm). La energía láser dentro de este haz elíptico se distribuye según una distribución normal, lo que garantiza una intensidad de iluminación constante para las células que pasan por el área de detección del láser. Por otro lado, el sistema óptico consta de múltiples conjuntos de lentes, orificios y filtros, que se pueden dividir aproximadamente en dos grupos: aguas arriba y aguas abajo de la cámara de flujo.
El sistema óptico delante de la cámara de flujo consta de una lente y un orificio. La función principal de la lente y el orificio (generalmente dos lentes y un orificio) es enfocar el rayo láser con una sección transversal circular emitido por la fuente láser en un haz elíptico con una sección transversal más pequeña. Esto distribuye la energía del láser según una distribución normal, lo que garantiza una intensidad de iluminación constante para las células en el área de detección del láser y minimiza la interferencia de la luz parásita.
Hay tres tipos principales de filtros:
1: Filtro de paso largo (LPF): solo permite que pase luz con longitudes de onda superiores a un valor específico.
2: Filtro de paso corto (SPF): solo permite el paso de luz con longitudes de onda inferiores a un valor específico.
3: Filtro de paso de banda (BPF): solo permite el paso de luz en un rango de longitud de onda específico.
Diferentes combinaciones de filtros pueden dirigir señales de fluorescencia en diferentes longitudes de onda a tubos fotomultiplicadores (PMT) individuales. Por ejemplo, los filtros para detectar fluorescencia verde (FITC) frente a PMT son LPF550 y BPF525. Los filtros utilizados para detectar fluorescencia rojo anaranjado (PE) frente al PMT son LPF600 y BPF575. Los filtros para detectar fluorescencia roja (CY5) delante del PMT son LPF650 y BPF675.
La citometría de flujo se utiliza principalmente para la clasificación de células. Con el avance de la tecnología informática, el desarrollo de la inmunología y la invención de la tecnología de anticuerpos monoclonales, sus aplicaciones en biología, medicina, farmacia y otros campos se están generalizando cada vez más. Estas aplicaciones incluyen análisis de dinámica celular, apoptosis celular, tipificación celular, diagnóstico de tumores, análisis de eficacia de fármacos, etc.
Hora de publicación: 21 de septiembre de 2023
