(Citometría de flujo, FCM) es un analizador celular que mide la intensidad de fluorescencia de los marcadores de células teñidas. Es una tecnología de alta tecnología desarrollada basada en el análisis y la clasificación de células individuales. Puede medir y clasificar rápidamente el tamaño, la estructura interna, el ADN, el ARN, las proteínas, los antígenos y otras propiedades físicas o químicas de las células, y puede basarse en la recolección de estas clasificaciones.
El citómetro de flujo consiste principalmente en las siguientes cinco partes:
1 Sistema de cámara de flujo y fluida
2 fuente de luz láser y sistema de modelado de haz
3 Sistema óptico
4 Sistema de electrónica, almacenamiento, visualización y análisis
5 Sistema de clasificación de células
Entre ellos, la excitación láser en la fuente de luz láser y el sistema de formación de haz es la principal medición de las señales de fluorescencia en la citometría de flujo. La intensidad de la luz de excitación y el tiempo de exposición están relacionadas con la intensidad de la señal de fluorescencia. El láser es una fuente de luz coherente que puede proporcionar una iluminación de longitud de onda única, alta intensidad y alta estabilidad. Es la fuente de luz de excitación ideal para cumplir con estos requisitos.
Hay dos lentes cilíndricas entre la fuente del láser y la cámara de flujo. Estas lentes enfocan un haz láser con una sección transversal circular emitida desde la fuente láser en un haz elíptico con una sección transversal más pequeña (22 μm × 66 μm). La energía láser dentro de este haz elíptico se distribuye de acuerdo con una distribución normal, asegurando una intensidad de iluminación constante para las células que pasan a través del área de detección de láser. Por otro lado, el sistema óptico consta de múltiples conjuntos de lentes, alfileres de alfileres y filtros, que se pueden dividir aproximadamente en dos grupos: aguas arriba y aguas abajo de la cámara de flujo.
El sistema óptico frente a la cámara de flujo consiste en una lente y un agujero de alfiler. La función principal de la lente y el agujero de alfiler (generalmente dos lentes y un agujero de alfiler) es enfocar el haz láser con una sección transversal circular emitida por la fuente láser en un haz elíptico con una sección transversal más pequeña. Esto distribuye la energía del láser de acuerdo con una distribución normal, asegurando una intensidad de iluminación constante para las células en el área de detección del láser y minimizando la interferencia de la luz perdida.
Hay tres tipos principales de filtros:
1: Filtro de pase largo (LPF): solo permite que la luz con longitudes de onda sea más alta que un valor específico para pasar.
2: Filtro de paso corto (SPF): solo permite la luz con longitudes de onda por debajo de un valor específico para pasar.
3: Filtro de paso de banda (BPF): solo permite pasar la luz en un rango de longitud de onda específico.
Las diferentes combinaciones de filtros pueden dirigir señales de fluorescencia a diferentes longitudes de onda a tubos fotomultiplicadores individuales (PMT). Por ejemplo, los filtros para detectar fluorescencia verde (FITC) frente a PMT son LPF550 y BPF525. Los filtros utilizados para detectar fluorescencia de color rojo naranja (PE) frente al PMT son LPF600 y BPF575. Los filtros para detectar fluorescencia roja (CY5) frente al PMT son LPF650 y BPF675.
La citometría de flujo se usa principalmente para la clasificación celular. Con el avance de la tecnología informática, el desarrollo de la inmunología y la invención de la tecnología de anticuerpos monoclonales, sus aplicaciones en biología, medicina, farmacia y otros campos están cada vez más extendidos. Estas aplicaciones incluyen análisis de dinámica celular, apoptosis celular, tipificación celular, diagnóstico tumoral, análisis de eficacia del fármaco, etc.
Tiempo de publicación: septiembre-21-2023
