La citometría de flujo (CFM) es un analizador celular que mide la intensidad de fluorescencia de los marcadores celulares teñidos. Es una tecnología de punta desarrollada a partir del análisis y la clasificación de células individuales. Permite medir y clasificar rápidamente el tamaño, la estructura interna, el ADN, el ARN, las proteínas, los antígenos y otras propiedades físicas o químicas de las células, basándose en la recopilación de estas clasificaciones.
El citómetro de flujo consta principalmente de las siguientes cinco partes:
1 Cámara de flujo y sistema de fluidos
2 Fuente de luz láser y sistema de conformación del haz
3 Sistema óptico
4 Sistema electrónico, de almacenamiento, visualización y análisis
5 Sistema de clasificación de células
Entre ellas, la excitación láser en la fuente de luz láser y el sistema de formación de haz es la principal medida de las señales de fluorescencia en la citometría de flujo. La intensidad de la luz de excitación y el tiempo de exposición están relacionados con la intensidad de la señal de fluorescencia. El láser es una fuente de luz coherente que puede proporcionar iluminación de longitud de onda única, alta intensidad y alta estabilidad. Es la fuente de luz de excitación ideal para cumplir estos requisitos.
Hay dos lentes cilíndricas entre la fuente láser y la cámara de flujo. Estas lentes enfocan el haz láser de sección circular emitido por la fuente láser en un haz elíptico de menor sección (22 μm × 66 μm). La energía láser de este haz elíptico se distribuye de forma normal, lo que garantiza una intensidad de iluminación uniforme para las células que pasan por el área de detección láser. Por otro lado, el sistema óptico consta de múltiples conjuntos de lentes, orificios y filtros, que pueden dividirse en dos grupos: aguas arriba y aguas abajo de la cámara de flujo.
El sistema óptico situado delante de la cámara de flujo consta de una lente y un orificio. La función principal de la lente y el orificio (normalmente dos lentes y un orificio) es enfocar el haz láser de sección transversal circular emitido por la fuente láser en un haz elíptico de sección transversal menor. Esto distribuye la energía láser según una distribución normal, garantizando una intensidad de iluminación uniforme para las células en toda el área de detección láser y minimizando la interferencia de la luz parásita.
Hay tres tipos principales de filtros:
1: Filtro de paso largo (LPF): solo permite el paso de luz con longitudes de onda superiores a un valor específico.
2: Filtro de paso corto (SPF): solo permite el paso de luz con longitudes de onda inferiores a un valor específico.
3: Filtro de paso de banda (BPF): solo permite el paso de luz en un rango de longitud de onda específico.
Diferentes combinaciones de filtros pueden dirigir señales de fluorescencia a distintas longitudes de onda a tubos fotomultiplicadores (PMT) individuales. Por ejemplo, los filtros para detectar fluorescencia verde (FITC) delante de los PMT son los LPF550 y BPF525. Los filtros utilizados para detectar fluorescencia naranja-roja (PE) delante de los PMT son los LPF600 y BPF575. Los filtros para detectar fluorescencia roja (CY5) delante de los PMT son los LPF650 y BPF675.
La citometría de flujo se utiliza principalmente para la clasificación celular. Con el avance de la tecnología informática, el desarrollo de la inmunología y la invención de la tecnología de anticuerpos monoclonales, sus aplicaciones en biología, medicina, farmacia y otros campos se están extendiendo cada vez más. Estas aplicaciones incluyen el análisis de la dinámica celular, la apoptosis celular, la tipificación celular, el diagnóstico de tumores, el análisis de la eficacia de fármacos, etc.
Hora de publicación: 21 de septiembre de 2023
